有機相：(如乙腈、甲醇):使用 HPLC級溶劑，經 0.22um有機濾膜過濾.   

水相：(如緩沖鹽、酸/堿溶液)  

用超純水配制：(電阻率>18.2 MΩ.cm)    

濾前超聲脫氣 15 分鐘，避免產生氣泡,再經 0.22 um 水相濾膜過濾

注意事項: 含鹽流動相需現配現用，防止微生物滋生或鹽析出。標注流動相成分、pH、配制日期。 

替換流動相瓶：關閉泵(防止吸入氣泡)取下舊流動相瓶，用新流動相潤洗瓶口和管路接口3次,安放新流動相瓶，確保管路浸入液面下(避免吸入氣泡)

開機與系統準備

開機順序:    打開電腦，啟動 Agilent OpenLab CDs 軟件。    

開啟儀器電源:泵→自動進樣器→柱溫箱→檢測器(DAD/VWD)。  

系統初始化/自檢:等待各模塊狀態顯示“就緒"    

灌注流動相(Purge)：設置泵為“灌注模式”(打開 Purge 閥，流速5 mL/min).依次灌注 A/B/C/D 四通道，每通道灌注3分鐘，排出管路氣泡。

關鍵點:灌注后，流速為0，關閉Purge閥，再恢復流速至正常值(如 1.0 mL/min)    

色譜柱安裝:  確認色譜柱流向(箭頭方向與流動相流向一致)連接色譜柱，手動擰緊(避免過緊導致漏液或損壞接口)設置流動相比例(如初始條件:95%水相+5%乙腈)流速逐步升高至工作流速(如 0.5→1.0 mL/min，每次增加0.2mL/min，間隔5分鐘)    

平衡時間:新柱至少 30分鐘(或至基線平穩);換流動相后平衡 15 分鐘。

注意事項:含鹽流動相替換為高有機相時，!需過渡沖洗(如先用10%甲醇過渡)監測柱壓波動(正常波動范圍±10%)

壓力異常處理:檢查是否漏液或流動相未充分脫氣管路內是有明顯氣泡，管路溶劑濾頭是否堵塞，流動相是否足夠，溶劑濾頭再液面以下，安捷倫的過濾小白頭是否定期更換，以上處理方法未解決異常需要考慮維護儀器單向閥、更換柱塞桿密封圈。

系統沖洗:若流動相含緩沖鹽，實驗結束后需以高水相(如 90%水 +10%甲醇)沖洗 30分鐘，再過渡至高有機相保存。

空白進樣測試: 進樣 20μL純溶劑(如流動相)，運行分析方法，確認無雜峰、基線平穩。

基線異常處理:若出現鬼峰:檢查流動相污染或管路殘留，重新沖洗系統。

基線漂移:檢查柱溫穩定性或流動相未充分脫氣，流通池污染流動相有長菌或結晶物質。

樣品分析與數據采集

樣品準備:樣品經 0.22 μm 濾膜過濾，裝入進樣瓶(避免過滿，液面距瓶囗≥5 mm)。樣品瓶可分為預開口和不預開口樣品瓶，可根據樣品特性和儀器特性進行選擇。

方法設置:創建新方法文件

設置參數泵:流動相比例、流速(如1.0 mL/min)

柱溫箱:溫度(如 30°C)

檢測器:波長(如 280 nm)、采樣速率(如 2 Hz)

自動進樣器:進樣體積(如 20 μL)、洗針次數(如 3次). 

運行序列:在序列表中添加樣品信息(名稱、位置、方法文件)點擊“運行序列”，實時監測色譜圖與壓力曲線。運行序列前務必要檢查樣品位置與序列表一致，方法設置是否一致，流動相管路有沒有放置錯誤，壓力和基線是否正常，上述檢查無異常后開始運行序列。

結束操作與關機

系統沖洗:實驗結束后，以高比例有機相(如 90%乙腈)沖洗色譜柱30 分鐘，去除殘留。

含鹽流動相:先用水相沖洗 30 分鐘，再過渡到有機相。

色譜柱保存:反相柱:保存在 90%以上甲醇或乙腈中，拆卸后兩端密封，正相柱:保存在正已烷中(需根據柱類型調整) 

關機順序:軟件中關閉流速，停止泵。關閉檢測器→柱溫箱一自動進樣器一泵。    退出軟件，關閉電腦及儀器電源，

日常維護清單

每日:檢查流動相余量(特別是需要過夜運行)、清潔自動進樣器外表面，檢查廢液瓶中廢液量及時清理廢液。

每周:更換在線過濾器濾芯，沖洗自動進樣針。每月:執行泵密封圈潤滑，檢測檢測器燈能量，建議結合儀器說明書與實驗室 SOP 靈活調整!